Cripsr/Cas9基因敲除小鼠

CRISPR/Cas9(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)是最新出现的一种由Cas核酸酶对靶向基因进行特定DNA修饰的技术。 CRISPR 是细菌和古细菌为应对病毒和质粒不断攻击而演化来的获得性免疫防御机制。在这一系统中,crRNA(CRISPR-derived RNA)通过碱基配对与tracrRNA(trans-activating RNA)结合形成双链RNA,tracrRNA/crRNA复合体指导Cas9蛋白在crRNA引导剪切双链DNA。CRISPR/Cas9系统能够对小鼠和大鼠基因组特定基因位点进行精确编辑。随着该系统的不断改进,Cas9基因敲除技术的优势更加明显。

构建gRNA-Cas9打靶质粒及靶点切割活性验证。CRISPR-Cas9(CRISPR-Cas9 RNA-gudide nuclease)基因敲除技术是继TALEN基因敲除技术之后又一大突破。与TALEN和ZNF技术相比,CRISPR/Cas9系统的载体构建和使用更加方便。基因敲除的特异性由gRNA而不是蛋白来确定,因此避免了复杂的质粒组装构建过程,甚至使同时敲除多个基因成为可能。改造后的CRISPR-Cas9载体使gRNA-Cas9在同一个载体上,使用更方便,剪切更高效。

​项目

说明

周期

费用

靶点设计

靶点位置尽量在基因CDS的前段,最好能破坏重要的结构域和所有的转录产物异构体

1周

免费

体外检测靶点活性

体外表达gRNA,Cas9酶,扩增靶点,酶切验证,筛选有切割活性的靶点进行Cas9/gRNA载体构建。

1周

3,000元

Cas9/gRNA载体构建

将gRNA序列信息连接到带Cas9的表达载体上,有多种针对动物优化的载体可供选择。

1周

3,000元

显微注射

将Cas9 mRNA/gRNA/供体DNA注射入小鼠受精卵。

1周

20,000元

胚胎移植

注射过的受精卵移植假孕受体雌鼠体内

3周

20,000元

子代小鼠基因型鉴定

鉴定假孕受体雌鼠子代小鼠基因型

1周

5,000元


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