慢病毒包装

技术原理

​慢病毒载体构建的基本原理是保留顺式作用元件,去除反式作用元件。

以HIV-1为基础的慢病毒载体系统由两部分组成,即核心载体成分和包装成分。包装成分由HIV-1基因组去除了包装、逆转录和整合所需要的顺式作用元件而构建,它能够反式提供产生病毒颗粒所必须的蛋白;载体成分则与包装成分互补,即含有包装、逆转录和整合所需的HIV-1顺式作用序列,同时具有异源启动子控制下的多克隆位点即在此位点插入的目的基因。为降低两种成分同源重组恢复成野生型病毒的可能,需尽量减少二者的同源性。包装成分一般情况下被分开构建到两个或三个质粒上,其目的也是降低恢复成野生型病毒的可能。将包装成分与载体成分的三个/四个质粒共同转染包装细胞后,经过超速离心即可在上清中获得只有一次性感染能力且无复制能力的、携带目的基因的HIV-1载体。

慢病毒载体的安全性

现在使用的慢病毒载体为自身失活慢病毒载体(SIN)。SIN 慢病毒载体去除了载体3’端长末端重复序列(LTR) 中的U3 区增强子和启动子序列,这使得在逆转录过程中形成的子代载体5’LTR 缺少增强子和启动子序列,因而即使在所有病毒蛋白都存在的情况下也不能转录RNA,一定程度上提高了载体的安全性。

实验流程

1.慢病毒载体构建

2.慢病毒包装及浓缩,测定滴度

3.感染细胞检测抑制或超表达效率

服务说明

1.针对一个基因设计4个序列,构建4条慢病毒载体,并进行慢病毒包装,最终提供给客户病毒浓缩液。

2.客户可提供慢病毒载体,说明载体信息,本公司提供慢病毒包装。

3.检测抑制或超表达效率,约一周。

4.最终提供病毒液滴度至少达到2×108TU/mL,若客户需要浓度更高的病毒液,可提前说明,最高可提供1×109TU/mL的病毒液。

收费标准

3000元/例

交付期限

3-4周

实例:

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       慢病毒感染颗粒细胞系KK1

      病毒感染293FT细胞系


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