染色质免疫共沉淀(Ch-IP)

一、技术原理

在生理状态下把细胞内的DNA与蛋白质交联在一起,通过超声或酶处理将染色质切为小片段后,利用抗原抗体的特异性识别反应,将与目的蛋白相结合的DNA片段沉淀下来,以富集存在组蛋白修饰或者转录调控的DNA片段,再通过多种下游检测技术(定量PCR、基因芯片、测序等)来检测此富集片段的DNA序列。

 

实验步骤

1.       样品准备与交联

细胞收集后,用37%formaldehyde处理细胞,交联核酸与DNA结合蛋白;加入甘氨酸终止。

2.       细胞超声波破碎染色质

用超声方法随机把染色质破碎成200-1000 bpDNA片段;片段分成两部分,一份用于免疫共沉淀,一份用于对照实验(Input DNA)。

3.       免疫沉淀反应

使用目的蛋白质的特异性抗体与超声破碎的DNA片段进行免疫沉淀,形成DNA-蛋白质-抗体复合物,利用protein A/G琼脂糖磁珠富集抗体复合物。通过抗原和抗体反应形成DNA-蛋白质-抗体复合体,然后沉淀此复合体,特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段

4.       DNA-蛋白质-抗体复合物的解交联和DNA纯化

将富集的DNA-蛋白质-抗体复合体解交联释放DNA片段,并进行纯化;Input DNA的片断作不进行IP实验,但需要去交联并纯化

5.       PCR鉴定

比较ChIP DNA, Input DNA及对照DNA信号强度,进行普通PCR或者相对精确的荧光定量PCR扩增。

 

三、服务流程

1.       甲醛处理细胞

2.       超声破碎染色质

3.       加入proteinA,沉淀抗体-靶蛋白-DNA复合物

4.       解交联

5.       PCR分析

 

四、服务说明

1.       客户提供

新鲜的样品材料(组织或细胞);ChIP级别的抗体(或由我公司代购);如ChIP结束后进行检测,input作为对照;如结束后进行普通PCR或者荧光定量PCR,则需要提供预测靶基因结合位点的具体序列或目标靶基因的名称、种属、序列或GeneBank Acession

2.       公司提供

1)检测图;

2)完整的实验报告,包括对每个步骤的详细说明(具体操作方法、试剂或溶液浓度等),以及相应的结果及分析。

3.       实验周期

3-4周。

4. 价格

9000/ (含试剂盒) 抗体由客户提供

 

五、质量承诺

提供清晰的图片、可靠的数据和分析结果。


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