细胞培养和转染

 细胞培养是指细胞在体外条件下的生长,可直接观察活细胞的形态结构和生命活动。用于细胞学、遗传学、免疫学、实验医学和肿瘤学等多种学科研究,其特点是能够提供大量生物性状相似的实验对象,比较经济。

体外培养的细胞根据增殖能力分为两大类,一类是可以无限增殖的肿瘤细胞系,一类是从机体取出后立即培养的细胞(原代细胞),这类细胞的增值能力很有限。培养细胞的条件非常严格,需要独立的培养细胞间,无菌的37℃恒温培养箱,整个培养过程需要在超净台中操作,严格保持无菌环境。
细胞培养基是人工模拟细胞在体内生长的营养环境,是提供细胞营养和促进细胞生长增殖的物质基础。基础细胞培养基主要包括199、MEM、RPMI-1640、DMEM 、DMEM/F12等。主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。人工合成培养基使用时还需添加一定量的小牛或胎牛血清使细胞生长和繁殖。不同的细胞需要不同的培养基,并且培养基的pH、渗透压、血清的添加浓度等因素对细胞培养也至关重要。

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细胞转染是指将外源分子如DNA,RNA等导入真核细胞的技术。是目前在研究基因功能实验中应用最广泛的技术,是最有效、最快速也是最经济的方法。一般转染的外源分子有各种质粒,设计合成的siRNA片段和miRNA的模拟片段或抑制片段。

转染的方法大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类。物理方法包括:电穿孔法和显微注射法;化学介导方法很多,如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术;生物介导方法,有较为原始的原生质体转染,和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。

理想细胞转染方法,应该具有转染效率高、细胞毒性小等优点。但无论采用哪种转染技术,要获得最优的转染结果,可能都需要对转染条件进行优化。影响转染效率的因素很多,从细胞类型、细胞培养条件和细胞生长状态,到转染方法的操作细节,再到转染的试剂浓度,转染时间等都需要仔细考虑。

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